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发布时间：2021-11-01
蛋白质晶体板制作
设计并制作了一种在微腔中对蛋白质进行微批量法(microbatch)结晶的碟式微流控结晶芯片，它是一种高通量、低成本、低耗样量(纳升级)、操作简便的蛋白质结晶筛选方法，这种芯片能成功地结晶溶菌酶(lysozyme)和青色荧光蛋白(CyPet).为了系统地比较这种微流控芯片与传统的使用蒸汽扩散法的24孔结晶板的结晶能力，用3个Hampton结晶试剂盒，在4℃及20℃培养条件下分别对5种标准蛋白(溶菌酶(lysozyme)、木聚糖酶(xylanase)、脂肪酶B(lipase B)、葡萄糖异构酶(glucose isomerase)和嗜热菌蛋白酶(thermolysin))进行了结晶筛选实验.结果表明，在4℃时微流控芯片与24孔结晶板有相近数目的结晶条件(91 vs 98)。
蛋白质结晶方法
结晶方法(Crystallization Techniques)1.1.1 分批结晶(Batch Crystallization) 这是老的简单的结晶方法，其原理是同步地在蛋白质溶液中加入沉淀剂，立即使溶液达到一个高过饱和状态。幸运的话，不需进一步处理即可在过饱和溶液中逐渐长出晶体。一个用于微分批结晶的自动化系统已被Chayen等人设计出（1991，1992），48孔蛋白结晶板，其微分批方法中，他们在1-2μl包含蛋白质和沉淀剂的液滴中生长晶体。液滴被悬浮在油（如石蜡）中，油的作用是作为封层以防止蒸发，它并不干扰普通沉淀剂，但是干扰能溶解油的(Chayen，48孔蛋白结晶板公司， 1997; see also Chayen， 1998)。
蛋白结晶板
蛋白质溶液和含有沉淀剂的溶液是彼此分层在一个有小孔的毛细管中，一个测熔点用的毛细管一般即可（如图1.2）。下层是密度大的溶液，例如铵或PEG溶液。如果如MPD被用作沉淀剂，48孔蛋白结晶板报价，它会在上层。以1：1混合，48孔蛋白结晶板哪家好，沉淀剂的浓度应该是所期终浓度的二倍。两种溶液（各自约5μl）通过针头导入毛细管，先导入下层的。通过一个简易的摇摆式离心机去除气泡。再加入上层，进而两层之间形成一个明显的界面。
